顯微鏡的七種觀察方法
一.明視野觀察
明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式,廣泛應(yīng)用于病理、檢驗(yàn),用于觀察被染色的切片,所有顯微鏡均能完成此功能。新泰科儀器INTEKE.CN
二.暗視野觀察
暗視野實(shí)際是暗場(chǎng)照明發(fā)。它的特點(diǎn)和明視野不同,不直接觀察到照明的光線,而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線。因此,視場(chǎng)成為黑暗的背景,而被檢物體則呈現(xiàn)明亮的象。
暗視野的原理是根據(jù)光學(xué)上的丁道爾現(xiàn)象,微塵在強(qiáng)光直射通過(guò)的情況下,人眼不能觀察,這是因?yàn)閺?qiáng)光繞射造成的。若把光線斜射它,由于光的反射,微粒似乎增大了體積,為人眼可見。
三.相差鏡檢法
在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過(guò)程中,相差鏡檢術(shù)的發(fā)明成功,是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就。我們知道,人眼只能區(qū)分光波的波長(zhǎng)(顏色)和振幅(亮度),對(duì)于無(wú)色通明的生物標(biāo)本,當(dāng)光線通過(guò)時(shí),波長(zhǎng)和振幅變化不大,在明場(chǎng)觀察時(shí)很難觀察到標(biāo)本.
相差顯微鏡的基本原理是,把透過(guò)標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差,從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度,使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。光線透過(guò)標(biāo)本后發(fā)生折射,偏離了原來(lái)的光路,同時(shí)被延遲了1/4λ(波長(zhǎng)),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變?yōu)?/2λ,兩束光合軸后干涉加強(qiáng),振幅增大或減下,提高反差。在構(gòu)造上,相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處:
1.環(huán)形光闌位于光源與聚光器之間,作用是使透過(guò)聚光器的光線形成空心光錐,焦聚到標(biāo)本上。
2.相位板在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種:
1.A+相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波合軸后光波相加,振幅加大,標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變亮,形成亮反差(或稱負(fù)反差)。
2.B+相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光線合軸后光波相減,振幅變小,形成暗反差(或稱正反差),結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗
四.微分干涉稱鏡檢術(shù)
微分干涉鏡檢術(shù)出現(xiàn)于60年代,它不僅能觀察無(wú)色透明的物體,而且圖象呈現(xiàn)出浮雕壯的立體感,并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達(dá)到的某些優(yōu)點(diǎn),觀察效果更為逼真。
微分干涉稱鏡檢術(shù)是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來(lái)分解光束。分裂出來(lái)的光束的振動(dòng)方向相互垂直且強(qiáng)度相等,光束分別在距離很近的兩點(diǎn)上通過(guò)被檢物體,在相位上略有差別。由于兩光束的裂距極小,而不出現(xiàn)重影現(xiàn)象,使圖象呈現(xiàn)出立體的三維感覺。
五.偏光顯微鏡
偏光顯微鏡的特點(diǎn):偏光顯微鏡是鑒定物質(zhì)細(xì)微結(jié)構(gòu)光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡。凡具有雙折射的物質(zhì),在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚,當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色發(fā)來(lái)進(jìn)行觀察,但有些則不可能,而必須利用偏光顯微鏡。雙折射性是晶體的基本特性。因此,偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物,化學(xué)等領(lǐng)域。在生物學(xué)和植物學(xué)也有應(yīng)用。
六.浮雕相襯顯微鏡
1975年,RobertHoffman博士發(fā)明
2002年,專利到期,各顯微鏡廠家紛紛推出采用以自己名義命名的RC技術(shù)產(chǎn)品
原理:斜射光照射到標(biāo)本產(chǎn)生折射、衍射,光線通過(guò)物鏡光密度梯度調(diào)節(jié)器產(chǎn)生不同陰影,從而使透明標(biāo)本表面產(chǎn)生明暗差異,增加觀察對(duì)比度
特點(diǎn):提高未染色標(biāo)本的可見性和對(duì)比度;圖象顯示陰影或近似三維結(jié)構(gòu)而不會(huì)產(chǎn)生光暈;可檢測(cè)雙折射物質(zhì)(巖石切片、水晶、骨頭);可檢測(cè)玻璃,塑料等培養(yǎng)皿中的細(xì)胞,器官和組織;聚光鏡的工作距離可以設(shè)計(jì)的更長(zhǎng);RC物鏡也可用于明場(chǎng),暗場(chǎng)和熒光觀察
七:熒光顯微鏡熒光鏡檢術(shù)是用短波長(zhǎng)的光線照射用熒光素染色過(guò)的被檢物體,使之受激發(fā)后而產(chǎn)生長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光,然后觀察。
優(yōu)點(diǎn):
•檢出能力高(放大作用)
•對(duì)細(xì)胞的刺激小(可以活體染色)
•能進(jìn)行多重染色
用途:
•物體構(gòu)造的觀察——熒光素
•熒光的有無(wú)、色調(diào)比較進(jìn)行物質(zhì)判別——抗體熒光等
•發(fā)熒光量的測(cè)定對(duì)物質(zhì)定性、定量分析